Western Blot以组织或细胞中的蛋白质为研究对象,经过SDS-PAGE分离蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的一抗起免疫反应,再与酶或同位素标记的二抗起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于定性检测蛋白水平的表达。
本文总结了Western Blot实验中常见的问题与解决方案,希望对大家有用,当然有描述不恰当的地方,欢迎批评指正。